GB/T 3543.5—1995
1 主题内容与适用范围
本标准规定了测定种子真实性和品种纯度的方法。
本标准适用于农作物种子质量的检测。
2 引用标准
GB/T 3543.2 农作物种子检验规程 扦样
GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 发芽试验
3 术语
3.1 种子真实性 genuineness of seed
供检品种与文件记录(如标签等)是否相符。
3.2 品种纯度 varietal purity
品种在特征特性方面典型一致的程度，用本品种的种子数占供检本作物样品种子数的百分率表示。
3.3 变异株 off-type
一个或多个性状(特征特性)与原品种育成者所描述的性状明显不同的植株。
3.4 育种家种子 breeder seed
育种家育成的遗传性状稳定的品种或亲本种子的最初一批种子，用于进一步繁殖原种种子。
3.5 原种 basic seed
用育种家种子繁殖的第一代至第三代，或按原种生产技术规程生产的达到原种质量标准的种子，用于进一步繁殖良种种子。
3.6 良种 certified seed
用常规种原种繁殖的第一代至第三代和杂交种达到良种质量标准的种子，用于大田生产。
4 试剂
苯酚、愈创木酚、过氧化氢、氢氧化钾、氢氧化钠、氯化氢。
5仪器和设备
其仪器设备也随方法的差异而不同。
a. 在实验室中测定
配备适宜的仪器(如体视显微镜、扩大镜、解剖镜)与试剂，以供种子形态、生理及细胞学的检查、化学测定及种子发芽之用。
b.在温室和培养室中测定
配备能调节环境条件的设备(如生长箱)，以利诱导鉴别性状的发育。
c.在田间小区里鉴定
需具有能使鉴定性状正常发育的气候、土壤及栽培条件，并对防治病虫害有相对的保护措施。
6 测定程序
6.1 送验样品的重量
品种纯度测定的送验样品的最小重量应符合表1的规定。
表 1　品种纯度测定的送验样品重量

6.2 种子鉴定
6.2.1 形态鉴定法
随机从送验样品中数取400粒种子，鉴定时须设重复，每个重复不超过100粒种子。
根据种子的形态特征，必要时可借助扩大镜等进行逐粒观察，必须备有标准样品或鉴定图片和有关资料。
水稻种子根据谷粒形状、长宽比、大小、稃壳和稃尖色、稃毛长短、稀密、柱头夹持率等；大麦种子根据籽粒形状、外稃基部皱褶、籽粒颜色、腹沟基刺、腹沟展开程度、外稃侧背脉纹齿状物及脉色、外稃基部稃壳皱褶凹陷、小穗轴茸毛多少、鳞被(浆片)形状及茸毛稀密等；大豆种子可根据种子大小、形状、颜色、光泽、光滑度、蜡粉多少及种脐形状颜色等；葱类可根据种子大小、形状、颜色、表面构造及脐部特征等。
6.2.2 快速测定法
随机从送验样品中数取400粒种子，鉴定时须设重复，每个重复不超过100粒种子。
a. 苯酚染色法
小麦、大麦、燕麦：将种子浸入清水中经18～24h，用滤纸吸干表面水分，放入垫有已经1％苯酚溶液湿润滤纸的培养皿内(腹沟朝下)。在室温下，小麦保持4h，燕麦2h，大麦24h后即可鉴定染色深浅。小麦观察颖果染色情况，大麦、燕麦评价种子内外稃染色情况。通常颜色分为五级即浅色、淡褐色、褐色、深褐色和黑色。将与基本颜色不同的种子取出作为异品种。
水稻：将种子浸入清水中经6h，倒去清水，注入1％(m/V)苯酚溶液，室温下浸12h取出用清水洗涤，放在滤纸上经24h，观察谷粒或米粒染色程度。谷粒染色分为不染色、淡茶褐色、茶褐色、黑褐色和黑色五级；米粒染色分不染色、淡茶褐色、褐色或紫色三级。
b. 大豆种皮愈创木酚染色法
将每粒大豆种子的种皮剥下，分别放入小试管内，然后注入1mL蒸馏水，在30℃下浸提1h，再在每支试管中加入10滴0.5％愈创木酚溶液，10min后，每支试管加入1滴0.1％过氧化氢溶液。1min后，计数试管内种皮浸出液呈现红棕色的种子数与浸出液呈无色的种子数。
c. 高粱种子氢氧化钾－漂白粉测定法
配制1：5(m/V)氢氧化钾和新鲜普通漂白粉(5.25％漂白粉)的混合液〔即1g氢氧化钾(KOH)加入5.0mL漂白液〕，通常准备100mL溶液，贮于冰箱中备用。将种子放入培养皿内，加入氢氧化钾－漂白液(测定前应置于室温一段时间) 以淹没种子为度。棕色种皮浸泡10min。浸泡中定时轻轻摇晃使溶液与种子良好接触，然后把种子倒在纱网上，用自来水慢慢冲洗，冲洗后把种子放在纸上让其气干，待种子干燥后，记录黑色种子数与浅色种子数。
d.燕麦种子荧光测定法
应用波长360A紫外光照射，在暗室内鉴定。将种子排列在黑纸上，置于距紫外光下10～15cm处，照射数秒至数分钟后即可根据内外稃有无荧光发出进行鉴定。
e. 燕麦种子氯化氢测定法
将燕麦种子放入早已配好的氯化氢溶液〔1份38％(V/V)盐酸(HCI)和4份水〕的玻璃器皿中浸泡6h，然后取出放在滤纸上让其气干1h。根据棕褐色(荧光种子)或 黄色(非荧光种子)来鉴别种子。
f.小麦种子的氢氧化钠测定法
当小麦种子红白皮不易区分(尤其是经杀菌剂处理的种子)时，可用氢氧化钠测定法加以区别。数取400粒或更多的种子，先用95％(V/V)甲醇浸泡15min，然后让种子干燥30min，在室温下将种子浸泡在5M/LNaOH溶液中5min，然后将种子移至培养皿内，不可加盖，让其在室温下干燥，根据种子浅色和深色加以计数。
6.2.3 小麦、大麦醇溶蛋白的酸性聚丙烯酰胺电泳法见附录A(参考件)。
6.3 幼苗鉴别
随机从送验样品中数取400粒种子，鉴定时须设重复，每重复为100粒种子。在培养室或温室中，可以用100粒，二次重复。
幼苗鉴定可以通过两个主要途径：一种途径是提供给植株以加速发育的条件(类似于田间小区鉴定，只是所需时间较短)，当幼苗达到适宜评价的发育阶段时，对全部或部分幼苗进行鉴定；另一种途径是让植株生长在特殊的逆境条件下，测定不同品种对逆境的不同反应来鉴别不同品种。
禾谷类：禾谷类作物的芽鞘、中胚轴有紫色与绿色两大类，它们是受遗传基因控制的。将种子播在砂中(玉米、高粱种子间隔1.0cm×4.5cm，燕麦、小麦种子间隔2.0cm×4.0cm，播种深度1.0cm)，在25℃恒温下培养，24h光照。玉米、高粱每天加水，小麦、燕麦每隔4d施加缺磷的Hoagland 1号培养液，在幼苗发育到适宜阶段时，高粱、玉米14d，小麦7d，燕麦10～14d，鉴定芽鞘的颜色。
注：缺磷的Hoagland 1号培养液配方：在1L蒸馏水中加入4mLM/L硝酸钙溶液〔Ca(NO3)2〕、2mL1M/L硫酸镁溶液（MgSO4)和6mL 1M/L硝酸钾溶液(KNO3)。
大豆：把种子播于砂中(种子间隔2.5cm×2.5cm，播种深度2.5cm)，在25℃下培养，24h光照，每隔4d施加Hoagland 1号培养液，至幼苗各种特征表现明显时，根据幼苗下胚轴颜色(生长10～14d)、茸毛颜色(21d)、茸毛在胚轴上着生的角度(21d)、小叶形状(21d)等进行鉴定。
注：Hoagland1号培养液配方：在1L蒸馏水中加入1mL 1M/L磷酸二氢钾溶液（KH2PO4)、5mL1 M/L硝酸钾溶液(KNO3)、5mL1 M/L硝酸钙溶液〔Ca(NO3)2〕 和2mL 1M/L硫酸镁溶液(MgSO4)。
莴苣：将莴苣种子播在砂中(种子间隔1.0cm×4.0cm，播种深度1cm)，在25℃恒温下培养，每隔4d施加Hoagland1号培养液，3周后(长有3～4片叶)根据下胚轴颜色、叶色、叶片卷曲程度和子叶等形状进行鉴别。
甜菜：有些栽培品种可根据幼苗颜色(白色、黄色、暗红色或红色)来区别。将种球播在培养皿湿砂上，置于温室的柔和日光下，经7d后，检查幼苗下胚轴的颜色。根据白色与暗红色幼苗的比例，可在一定程度上表明糖用甜菜及白色饲料甜菜栽培品种的真实性。
6.4 田间小区种植鉴定1)
田间小区种植是鉴定品种真实性和测定品种纯度的最为可靠、准确的方法。为了鉴定品种真实性，应在鉴定的各个阶段与标准样品进行比较。对照的标准样品为栽培品种提供全面的、系统的品种特征特性的现实描述，标准样品应代表品种原有的特征特性，最好是育种家种子。标准样品的数量应足够多，以便能持续使用多年，并在低温干燥条件下贮藏，更换时最好从育种家处获取。
注：1)本节等效采用国际贸易中种子流通的OECD品种认证方案《小区鉴定方法指南》(OECD1982)。
为使品种特征特性充分表现，试验的设计和布局上要选择气候环境条件适宜的、土壤均匀、肥力一致、前茬无同类作物和杂草的田块，并有适宜的栽培管理措施。
行间及株间应有足够的距离，大株作物可适当增加行株距，必要时可用点播和点栽。
为了测定品种纯度百分率，必须与现行发布实施的国家标准种子质量标准相联系起来。试验设计的种植株数要根据国家标准种子质量标准的要求而定，一般来说，若标准为(N-1)×100％/N，种植株数4N即可获得满意结果，如标准规定纯度为98％，即N为50，种植200株即可达到要求。
检验员应拥有丰富的经验，熟悉被检品种的特征特性，能正确判别植株是属于本品种还是变异株。变异株应是遗传变异，而不是受环境影响所引起的变异。
许多种在幼苗期就有可能鉴别出品种真实性和纯度，但成熟期(常规种)、花期(杂交种)和食用器官成熟期(蔬菜种)是品种特征特性表现时期，必须进行鉴定。
良种品种纯度是否达到国家标准种子质量标准、合同和标签的要求，可利用表2进行判别。

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